ABSTRACT
INTRODUCTION: The quantification of circulating Epstein-Barr virus (EBV) DNA is used to monitor transplant patients as an early marker of Post-Transplant Lymphoproliferative Disorders (PTLD). So far no standardized methodology exists for such determination. OBJECTIVE: Our purpose was to develop and validate a real-time PCR assay to quantify EBV DNA in clinical samples from transplant recipients. METHODS: A duplex real-time PCR method was developed to amplify DNA from EBV and from a human gene. The EBV load was determined in peripheral blood mononuclear cells (PBMC), plasma and oropharyngeal tissue from 64 non-transplanted patients with lymphoid-hypertrophy (Non-Tx), 47 transplant recipients without PTLD (Tx), 54 recipients with PTLD (Tx-PTLD), and 66 blood donors (BD). WinPEPI, version 11.14 software was used for statistical analysis. RESULTS: Analytical validation: the intra and inter-assays variation coefficients were less than 4.5% (EBV-reaction) and 3% (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase - GAPDH reaction). Linear ranges comprised 107-10 EBV genome equivalents (gEq) (EBV-reaction) and 500,000-32 human gEq (GAPDH-reaction). The detection limit was 2.9 EBV gEq (EBV-reaction). Both reactions showed specificity. Application to clinical samples: higher levels of EBV were found in oropharyngeal tissue from transplanted groups with and without PTLD, compared to Non-Tx (p < 0.05). The EBV load in PBMC from the groups of BD, Non-Tx, Tx and Tx-PTLD exhibited increasing levels (p < 0.05). In BD, PBMC and plasma, EBV loads were undetectable. CONCLUSIONS: The performance of the assay was suitable for the required clinical application. The assay may be useful to monitor EBV infection in transplant patients, in particular in laboratories from low-income regions that cannot afford to use commercial assays. .
Subject(s)
Adolescent , Adult , Child , Child, Preschool , Female , Humans , Infant , Male , Middle Aged , Young Adult , DNA, Viral/blood , Epstein-Barr Virus Infections/diagnosis , Heart Transplantation/adverse effects , /genetics , Kidney Transplantation/adverse effects , Liver Transplantation/adverse effects , Lymphoproliferative Disorders/diagnosis , Lymphoproliferative Disorders/virology , Real-Time Polymerase Chain Reaction , Sensitivity and Specificity , Viral LoadABSTRACT
While worldwide pandemic influenza A(H1N1) pdm case fatality rate (CFR) was 0.4%, Argentina's was 4.5%. A total of 34 strains from mild and severe cases were analyzed. A full genome sequencing was carried out on 26 of these, and a partial sequencing on the remaining eight. We observed no evidence that the high CFR can be attributed to direct virus changes. No evidence of re-assortment, mutations associated with resistance to antiviral drugs, or genetic drift that might contribute to virulence was observed. Although the mutation D225G associated with severity in the latest reports from the Ukraine and Norway is not observed among the Argentine strains, an amino acid change in the area (S206T) surrounding the HA receptor binding domain was observed, the same previously established worldwide.
Mientras que la tasa de letalidad (CFR) para (H1N1)pdm en todo el mundo era del 0.4%, en la Argentina la mortalidad observada fue de 4.5%. La secuenciación del genoma completo de 26 cepas de virus argentinos de influenza A (H1N1)pdm de casos leves y graves y de 8 cepas secuenciadas parcialmente no mostró evidencia de que la elevada tasa de letalidad se pueda atribuir directamente a cambios en el virus. No se encontraron hallazgos de recombinación, de mutaciones asociadas con la resistencia a los medicamentos antivirales ni de variaciones genéticas que puedan contribuir a la virulencia observada. Si bien la mutación D225G asociada con la gravedad, comunicada en informes procedentes de Ucrania y Noruega, no se ha encontrado en las cepas argentinas estudiadas, se ha observado un cambio aminoacídico en la región (S206T) en torno al dominio del sitio de unión al receptor en la HA, el mismo hallado en cepas distribuidas alrededor del mundo.
Subject(s)
Adolescent , Adult , Child , Child, Preschool , Female , Humans , Infant , Male , Middle Aged , Young Adult , DNA, Viral/genetics , Influenza A Virus, H1N1 Subtype/genetics , Influenza, Human/virology , Mutation/genetics , Argentina/epidemiology , Cluster Analysis , Influenza A Virus, H1N1 Subtype/isolation & purification , Influenza, Human/mortality , Molecular Sequence Data , Reproducibility of Results , RNA, Viral/genetics , Receptors, Virus/genetics , Severity of Illness IndexABSTRACT
Hay evidencias que sustentan la opinión de que los HPV de "alto riesgo" tienen una participación determinante en el cáncer de cérvix. Aún es tema de debate el papel de los HPV en la oncogénesis bucal, porque las tasas de detección son menores que en la patología de cuello de útero. Para verificar una posible correlación clinicopatológica de lesiones sospechosas de estar infectadas por HPV, e intentar relacionar la capacidad carcinogénica de los tipos de "alto riesgo" , se estudiaron histológica y virológicamente 35 pacientes con lesiones verrugosas, brillantes y húmedas, vegetaciones y queratosis, ubicadas en mucosa yugal, paladar duro y blando, cara dorsal, ventral y bordes de lengua, encía y rebordes alveolares. En el 32,5% de las muestras, se detectó ADN de HPV, y el tipo 11, solo o combinado con el tipo 16, fue identificado en la mayoría de las lesiones precancerosas y cáncer. Por otro lado, el tipo 16, considerado de alto riesgo, fue identificado en lesiones no relacionadas con una evolución carcinomatosa, como el condiloma acuminado, lesión de aspecto vegetante semejante en algunos casos a una cresta de gallo, localizada tanto en la región anogenital como en boca, y el nevo blanco esponja, enfermedad hereditaria que se manifiesta con lesiones blancas, plegadas y esponjosas que pueden afectar a varios miembros de una familia, con una evolución totalmente benigna.